关键词：葡聚糖凝胶；分配系数；凝胶处理；装柱；上样；洗脱

凝胶过滤层析是生化分离常用色谱技术的一种，凝胶层析的固定相是惰性的珠状凝胶颗粒，凝胶颗粒的内部具有立体网状结构，形成很多孔穴。当蛋白质分子通过装有凝胶颗粒的色谱柱时，根据它们分子大小不同而进行分离的技术。

1 葡聚糖凝胶技术的原理

凝胶颗粒内部具有多孔网状结构，被分离的混合物流过层析柱时，比凝胶孔径大的分子不能进入凝胶孔内，在凝胶颗粒之间的空隙向下移动，并最先被洗脱出来；比网孔小的分子能不同程度的自由出入凝胶孔内外，在柱内经过的路程较长移动速度较慢，最后被洗脱出来。

2 葡聚糖凝胶（Sephadex）的种类和性质

凝胶层析法适用于分离和提纯蛋白质、酶、多肽、激素、多糖、核酸类等物质。分子大小彼此相差25%的样品，只要通过单一凝胶床就可以完全将它们分开。利用凝胶的分子筛特性，可对这些物质的溶液进行脱盐、浓缩、去热源和脱色。

SephadexG ：G 后的数字为凝胶吸水值的10倍。G 反应凝胶的交联程度、膨胀程度和分部范围。根据不同的吸水值主要有：Sephadex G-1O、Sephadex G-15、Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75、SephadexG-150、Sephadex G-200。

3 分配系数（Kd）：Ve=Vo+Kd·Vi

每个溶质分子在流动相和固定相之间有一个特定的分配系数。

Vo简称为外水体积，Vo等于被完全排阻的大分子的洗脱体积。可以用一个已知相对分子质量远超过凝胶排阻极限的有色分子，如常用的蓝色葡聚糖-2000溶液通过柱床，即可测出柱床的外水体积Vo。

Vi简称内水体积，可由g.Wr求得（g为干凝胶质量，单位为g，Wr为凝胶吸水量，以mL/g表示）。Vi也可以从洗脱一种完全不受凝胶微孔排阻的小分子溶质（如重铬酸钾）的洗脱体积Ve计算，即对某物质在凝胶柱内洗脱体积Ve、Vo和Vi之间的关系可用下式表示： Ve=Vo+Kd·Vi。式中Ve为脱体积，它包括自加入样品时算起，，到组分最大浓度出现时所流出的体积。Kd为每个溶质分子在流动相和固定相之间的一个特定的分配系数，它只与被分离物质分子大小和凝胶颗粒内孔隙大小分布有关。Kd可通过实验由Ve、Vo和Vi求得。

当Kd=0时，Ve=Vo，说明这种溶质相对分子质量大，完全不能进入凝胶颗粒微孔内，被排阻于凝胶颗粒之外而最先洗脱下来；但实际上，约有1/5的内水因溶剂化作用而呈水合状态，妨碍小分子的自由扩散。故实际上Ve小分子 =Vo+0.8Vi；当0